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導(dǎo)讀

　　蛋白質(zhì)是一類與生命相關(guān)的生物大分子，其許多特定的生理或藥理活性在很大程度上和構(gòu)象有關(guān)，蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的基本類型有 α-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角、Ω環(huán)和無規(guī)卷曲。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系對于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)都具有非常重要的意義，蛋白質(zhì)構(gòu)象改變可引起疾病，如朊蛋白的二級結(jié)構(gòu)α-螺旋變?yōu)棣?折疊就會導(dǎo)致瘋牛病。蛋白質(zhì)中各種類型的二級結(jié)構(gòu)并不是均勻地分布在蛋白質(zhì)中，不同蛋白質(zhì)中β-折疊和β-轉(zhuǎn)角的數(shù)量也有很大的變化。二級結(jié)構(gòu)是通過骨架上的羰基和酰胺基團(tuán)之間形成的氫鍵維持的，氫鍵是穩(wěn)定二級結(jié)構(gòu)的主要作用力。

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)常見分析方法比較

　　注：CDE（CENTER FOR DRUG EVALUATION）即藥品審評中心

　　下面小編帶您一起了解，紅外光譜法分析牛血清白蛋白二級結(jié)構(gòu)的案例。

島津方案

　　分析利器

　　特點介紹

　　分析流程圖

　　方法學(xué)結(jié)果

　　牛血清白蛋白紅外測試

　　與二級結(jié)構(gòu)相關(guān)的紅外吸收在多個吸收重疊的狀態(tài)下，在1650 cm-1附近作為一個寬譜峰出現(xiàn)，該譜峰被稱為“酰胺Ⅰ帶”，是源于肽鍵C＝O基的伸縮振動，對于研究二級結(jié)構(gòu)很有價值。使用紅外和ATR附件分別對牛血清白蛋白和水進(jìn)行紅外測試，并通過軟件計算得到差譜，見圖1。

圖1. 牛血清白蛋白、H2O的紅外光譜及差譜譜圖

　　二階導(dǎo)數(shù)光譜

　　在進(jìn)行分峰時，需要提前設(shè)置吸收帶的峰形、峰個數(shù)等的初始值，使用二階導(dǎo)數(shù)確定峰的個數(shù)。用圖2所示的二階導(dǎo)數(shù)光譜中計算了1700~1480 cm-1范圍內(nèi)峰的波數(shù)和個數(shù)。

圖 2. 牛血清白蛋白的二階導(dǎo)數(shù)光譜

　　分峰擬合

　　基于二階導(dǎo)數(shù)光譜信息，對圖1的差譜在1760~1480 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行分峰擬合，圖3顯示了曲線分峰之前的紅外光譜、通過曲線擬合確定的各個峰以及從各個峰合成的光譜。如果曲線擬合精度良好，則測量光譜和合成光譜應(yīng)匹配良好。

圖3. 通過分峰得到的各峰值和合成光譜

　　蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)分析

　　對構(gòu)成酰胺Ⅰ帶的1700~1600 cm-1附近的波形進(jìn)行峰值檢測，求得譜峰波數(shù)和校正面積。其結(jié)果如表1所示。對各峰進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)分配，求得二級結(jié)構(gòu)的比例。通過上述操作，求得α-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角、無規(guī)卷曲的比例分別為23.30%、37.13%、27.56%和12.00%。

表1. 分峰峰值分析

結(jié)語

　　每種氨基酸殘基都是發(fā)色團(tuán), 它適用于不同狀態(tài)、不同濃度及不同環(huán)境中蛋白質(zhì)和多肽的測定，紅外光譜各種實驗技術(shù)的發(fā)展, 為研究蛋白質(zhì)及多肽的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系提供了有力手段。紅外光譜法對牛血清白蛋白進(jìn)行分析，通過酰胺Ⅰ帶進(jìn)行分峰，可以方便解析水溶液中蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)，對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究提供依據(jù)。

　　本文源于：S. Iwasaki, R. Fuji（島津制作所**應(yīng)用技術(shù)開發(fā)中心），使用FTIR分峰法對牛血清白蛋白進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)分析。